Issue 28.1 - Septiembre 2020

Dermatología canina y felina

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Trastornos relacionados con la alimentación y la raza en el perro

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Control de calidad en las dietas hidrolizadas

Elegir una dieta adecuada para perros y gatos con reacción adversa al alimento no es sencillo y se pueden cometer errores por desconocimiento. En este artículo, el Dr. Naar y la Dra. Lesponne nos resumen cómo Royal Canin garantiza que las dietas “Anallergenic” estén libres de proteínas no deseadas.

La reacción adversa al alimento (RAA) en el perro y el gato es una causa relativamente común de signos clínicos cutáneos en la clínica veterinaria. Las dietas para la RAA se emplean para el diagnóstico (mediante la prueba de eliminación) y el tratamiento. Se pueden clasificar en dos categorías generales:

1. Dietas con una fuente de proteína “seleccionada” o novel, con una cantidad limitada de fuentes de proteína e, idealmente, una única fuente de carbohidratos.

2. Dietas hidrolizadas, que contienen proteína parcial o altamente hidrolizada.

Al realizar la prueba de eliminación se pueden cometer algunos errores. Los principales motivos de preocupación en una dieta de eliminación son que esté libre de cualquier otra proteína (en la fabricación de alimentos para mascotas se debe prestar especial atención a la posible contaminación cruzada) y, si se trata de una dieta con proteína hidrolizada, que se garantice un nivel de hidrólisis que asegure que no quede ningún fragmento alergénico residual. En estudios recientes se ha puesto de manifiesto que algunas dietas comercializadas para el control de la RAA (la mayoría sin prescripción veterinaria) contienen ingredientes y/o moléculas de elevado peso molecular; por ejemplo, se observaron diferencias entre el resultado del análisis proteico y la proteínas declaradas en cerca del 75% de las dietas estudiadas ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ). Por este motivo, para garantizar la ausencia de contaminación cruzada en los productos es necesario tener en cuenta estos 3 elementos clave: caracterización completa de las materias primas, equipos y procesos de limpieza adecuados, y controles analíticos óptimos.

Recientemente se ha realizado un estudio para confirmar la composición proteica específica de las dietas Anallergenic de Royal Canin para perros y para gatos (basadas en proteína de pluma de ave intensamente hidrolizada y almidón de maíz), así como la eficacia del proceso de control de contaminación cruzada.

• La composición proteica se determinó mediante cromatografía de alta sensibilidad y técnicas electroforéticas y proteómicas en un laboratorio externo independiente. Los resultados obtenidos confirmaron el intenso nivel de la hidrólisis (Figura 1), la ausencia de proteínas en los potenciadores de palatabilidad (incluyendo el recubrimiento de la croqueta) y la ausencia de contaminación cruzada ( 4 ). Se detectó a la glicoproteína del almidón de maíz GBSS (almidón sintasa unida a gránulos), de la que no se conocen efectos adversos en mascotas hasta la fecha y es ubicua; sin embargo, no se encontraron proteínas transportadoras de lípidos (LTP), cuyo potencial alergénico es reconocido. Los resultados de la dieta para perros fueron los mismos que los de la dieta para gatos ( 4 ).

Figura 1. Electroforesis proteica de tres materias primas diferentes basadas en ave, incluyendo la proteína de pluma intensamente hidrolizada de las dietas Anallergenic.

Leyenda:

NHCM (harina de ave no hidrolizada): se pueden observar muchas proteínas de diferente peso molecular.
EHPF (proteína de pluma de ave intensamente hidrolizada de Anallergenic): no se observa banda.
MHPF (proteína de pluma de ave moderadamente hidrolizada): se observan proteínas residuales grandes.
MW: peso molecular en kilodaltons (kDa).

Nota: Mediante esta técnica no se visualizan los aminoácidos libres. El artefacto del gel era un depósito anterior a la migración.
Figura 2. Se analiza cada lote de producción para determinar si existe contaminación cruzada utilizando un análisis de ADN específico de 3 pasos.

Paso 1: Se mide el contenido total de ADN y se compara con el umbral establecido durante un ensayo preclínico multicéntrico en perros que padecían RAA complicada o refractaria ( 5 ).

Paso 2: Si el nivel de ADN excede el umbral, se realiza un análisis de PCR para determinar el tipo de contaminación proteica.

Paso 3: La concentración de proteína no deseada se calcula a partir de la medición total del ADN utilizando una curva de calibración. Esto se conoce como “índice de contaminación no proteica” o NPPI. Si el NPPI es igual o inferior al umbral aceptable, el lote puede salir a la venta; si el NPPI supera el límite aceptable, el lote se desecha.

• Los riesgos de contaminación cruzada se valoran analizando cada lote de producción mediante un análisis específico de ADN en 3 pasos (Figura 2). Dicho análisis implica la medición del contenido total de ADN en la dieta y la comparación de los resultados del mismo con un umbral de conformidad establecido durante un ensayo pre-clínico multicéntrico ( 5 ). Si se detecta un nivel de ADN superior al umbral, se realiza un análisis de PCR para identificar la fuente de contaminación. Para correlacionar el ADN con las proteínas no deseadas se emplean “curvas de calibración” que determinan la concentración presente de proteína.

Desde el lanzamiento de la dieta Anallergenic en el 2011, se ha empleado este método en más de 2.500 lotes de producción, y se ha evidenciado la conformidad con los estándares exigidos en todos ellos. Una vez que el producto es conforme puede salir a la venta ( 6 ) ( 7 ) ( 8 ).

Agradecimientos al Laboratorio Central de Mars Petcare, Aimargues (Francia), y el Instituto de Ciencia y Tecnología de Luxemburgo.

Conclusión

Gracias a las rigurosas medidas del control de calidad (selección cuidadosa de las materias primas, estrictos protocolos de fabricación y métodos de limpieza, y análisis de ADN rigurosos) no existe contaminación cruzada en las dietas Anallergenic, lo cual, junto con la hidrólisis intensa demostrada, permite garantizar la óptima eficacia y fiabilidad de Anallergenic para el diagnóstico y manejo de la RAA.

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